引言 朊病毒是一类引发人类和动物脑部蛋白质异常折叠的可传播病原体，感染后通常会导致致命性脑损伤。此类神经退行性疾病的实例包括羊瘙痒症、疯牛病（牛海绵状脑病）以及克雅二氏病。以往对朊病毒的研究需要长时间的生物测定，感染动物的观察周期通常为1到6个月，这不仅耗时而且成本高昂。为了解决这一问题，位于蒙大拿州汉密尔顿的落基山实验室开发了一种新的朊病毒接种测定方法，即实时震荡诱导转化测定法（RT-QuIC），该方法可以对受感染样本中的朊病毒水平进行快速、准确的终点定量测定。

检测原理 RT-QuIC检测法用于估算朊病毒接种的相对数量。该方法通过测量样本的连续稀释，统计估算接种剂量。在此过程中，极少量的传染性朊病毒被添加到正常的朊病毒蛋白中，诱导其发生类似疾病的错误折叠。测定通过了解样本的稀释度并确定接种活性损失（SD50）进行量化，从而提供精确的结果。

实验步骤 整个检测周期为20到68小时，仪器设置为在42°C下恒温孵育。实验编写了两个测试运行协议。第一个协议中，设备每分钟进行一次振荡，接着静置一分钟；第二个协议则设定为每15分钟使用底部光学镜进行一次荧光终点测量。用于测定的荧光染料为硫黄素T（ThT），当其与朊病毒蛋白结合时，荧光信号会随时间增加。

仪器设置 在进行荧光终点底部读取时，激励滤光片设定为450纳米，排放滤光片为480纳米，闪光灯强度为2000，振荡速度为700RPM。分析方法采用与生物测定的50%致死剂量（LD50）相似的斯皮尔曼-凯伯（Spearman-Kärber）分析法，以估算每克组织中50%的孔出现ThT阳性反应的播种剂量（SD50/g）。

结果与讨论 使用软件脚本对RT-QuIC检测进行了20至68小时的测量，并从8个重复孔中提取相对荧光单位的平均值。FLUOstarOmega酶标仪的设计非常适合高通量和长时间的检测。在整个期间，孵育温度持续保持在42°C，确保了数据的可靠性与稳定性。

数据表明，RT-QuIC检测可被视作快速且高通量的替代性方法，相较于传统整动物生物测定而言，其灵敏度和效率都有显著提升。此外，接种后仅十天的动物样本也能够通过该方法得到有效检测。

结论 使用RT-QuIC检测法和酶标仪，使得朊病毒接种的测量过程更加快速高效。已经证明可用于RT-QuIC检测的传染性海绵状脑病包括仓鼠及绵羊的瘙痒症、鹿的慢性消耗性疾病、克雅氏病（CJD）和牛海绵状脑病（BSE）。得益于人生就是博-尊龙凯时的优秀技术支持，BMGLABTECH的Omega系列酶标仪展现出强大的性能和耐久性，能够支持连续多日高强度的振动检测。选择FLUOstarOmega，您将体验到更快、更高通量的监测方式，同时其内置的震动与温度控制功能是检测有效性的关键。

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