在之前的干货分享中，我们已详细了解了Western Blot实验中蛋白浓度的四种测定方法。本篇旨在探讨样本制备过程中常见的问题以及对应的解决方案。

问题一：蛋白浓度低

导致蛋白浓度低的原因可能包括以下几个方面：

1. 细胞或组织量偏少。
2. 样本与裂解液的比例不合适。
3. 未充分裂解样本。
4. 所选的蛋白浓度测定方法不合适。

解决方案：

1. 增加样本量。
2. 根据样本量调整裂解液的量，例如针对100万细胞或20mg组织，应加入100-200μL裂解液。
3. 确保裂解时间充分，通常需要在低温下裂解10-30分钟，通过物理破碎处理组织样本，或者用吹打或颠倒混匀处理细胞样本。
4. 选择适合的蛋白浓度测定方法。

问题二：出现透明胶状物

这种现象通常是由于基因组复合物释放所致。解决方案如下：

1. 可进行适当的超声处理，或者使用1mL注射器反复抽吸，以打断基因组DNA，使其粘稠感消失。
2. 在加入龄化Buffer进行煮沸变性时，可以稍微延长煮沸的时间，充分煮沸能使结合在基因组DNA上的蛋白完全释放，同时部分断裂基因组DNA，减少粘稠感。
3. 在裂解过程中，可考虑在裂解液中加入广谱核酸酶。

问题三：上清漂浮一层油脂

当样本富含脂肪时，可能会出现这一现象。解决方案包括：

1. 裂解后将样本置于低温静置，随后吸出漂浮的油脂。
2. 若吸取后仍未达到预期效果，可尝试使用二氧化硅进行吸附。

在进行蛋白浓度测定及样本制备时，确保以上解决方案得以实施，将能有效提升实验的准确性与重复性。通过这些措施，我们期待在每一次的实验中都能取得最佳成果。毕竟，人生就是博-尊龙凯时，每一次都值得全力以赴。