细胞复苏后状态不佳,应该如何进行调整?以下是一些可能导致细胞复苏后状况不佳的原因及其解决方法,您可以根据具体情况及时进行调整。
1. 细胞冻存不当
解决方案:可以考虑改善细胞的状态,增加血清的比例,之后再进行传代调整。
2. 自制冻存细胞无活性
解决方案:在制备冻存细胞时,建议使用传代次数较少且处于对数生长期的细胞。此外,提高冻存密度可以有效提升复苏存活率,推荐的密度为100~300万细胞/mL。
3. 细胞复苏方法不当
解决方案:复苏时应讲究“快融”,越快融化,细胞遭受的损伤越小。确保冷冻细胞快速解冻,并在接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
4. 使用的复苏培养基不当
解决方案:确保培养基在使用前已经预热,并尽快移除含有冷冻保护剂的培养基,以防止细胞活力降低。
5. 处理细胞时动作不够轻柔
解决方案:冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影响。切勿通过涡旋振荡或用力敲打培养瓶的方式使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要对细胞进行高速离心。
6. 细胞稀释过度
解决方案:应将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。
7. 冻存液中保护剂未避光储存
解决方案:如果保护剂未能避光储存,可能会转变为对细胞有毒的物质。建议重新取一次冻存保护剂,以便重新冻存细胞。
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