人生就是博-尊龙凯时为您提供大鼠成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like Synoviocytes, FLS）的培养指导，确保您的细胞实验顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM+10%FBS+1%双抗

传代方法：建议第一次1:2传代，2天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集细胞培养基，以便进行对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，培育至良好状态，灌满完全培养液并密封瓶口是确保细胞活力的最佳方法。在无菌操作环境中，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后将其放入37℃、5% CO2培养箱静置3-4小时以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄各倍数照片保存（最好40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片为重要售后依据，未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2 环境中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状况；若细胞变圆且脱落，迅速轻拍瓶身并加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至每瓶5-8ml，置于37℃、5% CO2培养箱继续培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并使用PBS清洗一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，将悬液转移至15ml离心管中，在1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需要将细胞转入液氮罐，则需在-80℃冰箱存放超过24小时后再进行转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管后，迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中部分细胞可能因粘附性差而脱落，属于正常现象。如脱落较多，采用以下方法操作：将所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养，沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，待细胞脱落后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，重悬于1-2ml完全培养基中，按1:2比例分瓶传代。

五、售后条款

若细胞出现问题，根据具体情况考虑重发。对因运输问题、污染问题、细胞活性问题等造成的损失，提供真实实验记录后可重发。请注意细胞状态不良时未能及时反馈，或因用户操作不当导致的问题一般不予重发。

人生就是博-尊龙凯时致力于为您提供优质的细胞培养服务，确保您的实验取得成功。如需了解更多信息，请随时与我们联系。