电泳缓冲液在核酸和蛋白质电泳系统中扮演着关键角色,它不仅是电泳场中的导体,还能够维持电泳系统的恒定pH值。在生物医学研究中,常用的核酸电泳缓冲液包括TAE、TBE、TPE和MOPS等。
电泳缓冲液的类型与特点
1. TAE是使用最广泛的缓冲系统。其优点在于能够更接近真实的相对分子质量,使得超螺旋结构在其中迁移时的表现更为准确。此外,双链线状DNA在TAE缓冲液中的迁移率相比其他两种缓冲液快约10%。对于大于13kb的DNA片段,使用TAE可获得更优的分离效果,并且在回收DNA片段时,TAE缓冲系统也更加方便。然而,TAE的不足之处在于缓冲能力较小,因此不适合长时间电泳,除非配有循环装置进行缓冲液更换。
2. TBE的特点是缓冲能力较强,适合长时间电泳,尤其在电泳小于1kb的DNA片段时,分离效果更佳。然而,在琼脂糖凝胶中使用TBE时,由于电渗作用较高,且其与琼脂糖的非共价结合可能降低DNA片段的回收率,因此不推荐在电泳回收中使用。
3. TPE的缓冲能力同样较强,然而其磷酸盐在乙醇沉淀过程中容易析出,所以在DNA片段的电泳回收中不宜使用。
电泳缓冲液的主要功能
1. 一个主要功能是维持适宜的pH值。在电泳过程中,阳极和阴极均会发生电解反应,结果导致电解液的酸碱平衡发生变化。一个高效的缓冲系统应具备较强的缓冲能力,以确保溶液两极的pH值保持稳定。
2. 另一个重要功能是提供一定的导电性,促进DNA分子的迁移。一般情况下,电泳缓冲液中应含有0.01-0.04 mol/L的Na+离子。若Na+离子的浓度过低,电泳速度会减缓;反之,过高的浓度则可能导致过大电流,使得凝胶发热甚至熔化。
3. 电泳缓冲液通常还含有EDTA,浓度为1-2 mmol/L,其目的是螯合Mg2+等离子,以防止在电泳过程中激活DNA酶。此外,EDTA还可以防止Mg2+与核酸发生沉淀反应。
在生物医学研究领域,如若使用人生就是博-尊龙凯时品牌的电泳缓冲液,将确保实验结果更加精确。同时,它的高质量产品将为科研人员提供可靠支持,助力创新研究的开展。